antosiuk białystok okulista

Immunobloty pokazują indukowaną przez insulinę fosforylację tyrozyny IR-. oraz IRS1, T308 fosforylację AKT i ich całkowity poziom białka w lizatach tkanek przodomózgowia od 8-tygodniowych myszy WT i Mecp2a / +. W celu stymulacji insuliną zwierzęta leczono insuliną (0,75 mU / g, ip) przez 15 minut. Wszystkie bloty są reprezentatywne dla eksperymentów przeprowadzonych 3 razy. Aby scharakteryzować tę obserwację dalej, zbadaliśmy odpowiedź sygnalizacyjną insuliny u myszy Mecp2a / y i Mecp2a / +. W męskich myszach Mecp2 (/ y, które są nieobecne w MECP2, wywołana przez insulinę fosforylacja IR-y tyrozyny i RS1 był znacząco atenuowany w porównaniu z odpowiedzią obserwowaną u zwierząt WT (Figura 1C). Rekrutacja fosforylowanego IRS1 do kompleksu z receptorem insuliny (IR) wyzwala aktywację fosfatydyloinozytolowej 3-kinazy (PI3K) i stymulację dalszych cząsteczek sygnałowych, takich jak PKB / AKT, co powoduje dezaktywację kinazy syntazy glikogenu-3. (GSK3.), Translokacja transporterów glukozy i wychwyt glukozy (22). W związku z tym zbadano fosforylację kinazy AKT i dodatkowe elementy sygnalizacyjne w dół. W przeciwieństwie do myszy WT, myszy Mecp2a / y wykazywały zmniejszoną indukowaną przez insulinę fosforylację AKT i jej substratów FOXO i GSK3 .. Chociaż odpowiedź sygnalizująca na insulinę była zmniejszona u myszy z mutacją MECP2, zwierzęta te miały wyższe poziomy hormonu we krwi (dodatkowa Figura 1A). Są to cechy klasycznego przykładu insulinooporności. Podobne trendy obniżonej fosforylacji tyrozyny IR-. i IRS1, wraz ze zmniejszoną aktywacją AKT, obserwowano u samic myszy Mecp2a / + (Figura 1D). W związku z tym dane sugerują, że te modele RTT mogą również charakteryzować się zaburzeniem metabolicznym charakteryzującym się zaburzeniami sygnalizacji insuliny i nieprawidłowym metabolizmem glukozy. Jednym potencjalnym mechanizmem tego efektu byłoby to, że utrata ekspresji Mecp2 spowodowała wzrost poziomów lub aktywności białkowej fosfatazy tyrozynowej, która normalnie działa jako antagonista sygnalizacji insuliny. Dlatego przetestowaliśmy wpływ utraty Mecp2 na ekspresję genów w mysim przodomózgowiu, aby zidentyfikować kandydatów, którzy są zaangażowani w kontrolę sygnalizacji insuliny (Figura 2A) i metabolizm glukozy (Suplementowa Figura 2A) i regulowani przez MECP2. Figura 2 Mutacje mutantów Mecp2 wyrażały wyższe poziomy PTP1B. (A) Całkowity RNA otrzymany z myszy WT i Mecp2y / y poddano odwrotnej transkrypcji i cDNA wykorzystano w analizie qPCR. Zmierzono względną zmianę ekspresji genów w szlaku sygnałowym insuliny u myszy mózgowych mpp2 / / w porównaniu z WT i dane znormalizowano do ekspresji Gapdh (n = 3, dane reprezentują średnią . SEM). (B) Serię konstruktów reporterowych zawierających różne długości promotora PTPN1 wyrażono w komórkach HEK293T, razem z kontrolą lub MECP2-E1. lub plazmidy eksprymujące MECP2-E2a. Ekspresja zarówno izoform MECP2-E1 (jasnoszary) lub MECP2-E2 (ciemnoszary) tłumiona aktywność promotora PTPN1 (n = 3, dane przedstawiają średnią. SEM). (C) Konstrukty reporterowe promotora PTPN1 eksprymowano w komórkach HEK293T, razem z kontrolą lub WT MECP2. lub plazmidy eksprymujące MECP2a R168X. Ekspresja R168X MECP2 (szary), w przeciwieństwie do WT MECP2 (czarny), nie hamowała aktywności promotora PTPN1 (n = 3, dane reprezentują średnią. SEM). (D) Immunobloty pokazujące poziomy PTP1B w lizatach przodomózgowia uzyskane od samców myszy Mecp2a / y i WT; te same lizaty zastosowano do wymywania dla MECP2 i aktyny kontroli obciążenia. Wykres pokazuje ilościową analizę immunoblotów. Wszystkie bloty są reprezentatywne dla eksperymentów przeprowadzonych 3 razy. (E) Immunobloty pokazujące poziomy PTP1B w lizatach przodomózgowia otrzymanych od samic myszy Mecp2a / + i WT; te same lizaty zastosowano do wymywania dla MECP2 i aktyny kontroli obciążenia
[więcej w: omega kleszczów, olej z wiesiolka, odleżyny leczenie ]