EDL myszy WT tolerowało szeroki zakres stężeń K +, z mniejszą niż 20% siłą od 2 do 10 mM. Przeciwnie, zaobserwowano wyraźną 50% utratę siły dla homozygotycznego R528Hm / m EDL w 3 mM K +, a stratę 90% zaobserwowano w mM K +. Mięśni od heterozygotycznych myszy R528H + / m miały łagodniejszy fenotyp. początek znacznego zmniejszenia siły zaobserwowano przy 2 do 3 mM K +. Odwrotnie, odpowiedzi wyzwalaczy ED5 R528H na wysokie K + 8 do 10 mM były identyczne jak w przypadku WT EDL, a tym samym wykluczono fenotyp okresowego porażenia okresowego hiperkalemicznego. Te dane in vitro z prowokującym wyzwaniem K + wykazują wyraźny fenotyp HypoPP, przy czym podatność na utratę siły mięśniowej zależy od dawki zmutowanego allelu R528H. In vivo utrata pobudliwości i siły mięśni wywołanej glukozą i prowokacją insuliną. Podatność na ataki HypoPP in vivo oceniano za pomocą prowokacyjnych testów wlewu iv glukozy z insuliną, która sprzyja przejściowej hipokaliemii i była stosowana do badań diagnostycznych u ludzi (2). Podobnie jak w poprzednim badaniu z myszami HypoPP NaV1.4 (22), zwierzęta były wstępnie kondycjonowane doustną żywicą wiążącą K (Kayexalate), która obniżyła wyjściowe stężenie K + do 2,7. 0,10 mM (n = 37, brak różnic między myszami WT i R528H), ale nie wywoływał ataków paraliżu. Myszy były ciągle znieczulane izofluranem, a nerw kulszowy był stymulowany do monitorowania pobudliwości elektrycznej mięśni i wytwarzania siły. Złożony potencjał czynnościowy mięśni (CMAP) i siła skurczowa mięśni łydek kończyny tylnej (brzuchaty łydki i płaszczkowaty) rejestrowano jednocześnie (ryc. 4A). Podstawowa amplituda CMAP, przed infuzją, została zmniejszona o więcej niż 50% u myszy R528H + / m i R528Hm / m, bez żadnego odchylenia płciowego (Figura 4B). Odpowiednio do zmniejszonej elektrycznej pobudliwości włókien, wyjściowa siła skurczu była niższa u myszy R528H, chociaż różnica względem WT (19,8. 2,5 g, n = 8) była statystycznie przedstawiona tylko dla myszy R528Hm / m (R528Hm / m: 11,5. 1.9 g, n = 9, P <0,05; R 528H + / m: 17,0,5, 2.3 g, n = 9, P = 0,4). Rycina 4 Atak HypoPP in vivo na glukozę z prowokacją insuliną. (A) Każdy ślad pokazuje siłę mięśni (niebieski) i CMAP (czarny) rejestrowane jednocześnie w odpowiedzi na pojedynczy szok (czerwony) zastosowany do nerwu kulszowego. Stymulację nerwu stosowano raz na minutę, a każdy przebieg był dla pojedynczej próby, bez uśredniania. U tej myszy R528Hm / m, dożylne podawanie glukozy i insuliny powodowało przejściowy wzrost szczytowej siły podczas pierwszych 10 minut, po którym nastąpiło głębokie zmniejszenie maksymalnej siły. Amplituda szczytowej wartości CMAP zmniejszyła się o 75% podczas infuzji i nie towarzyszyło początkowo wzrostowi przejściowemu. (B) Podstawowa amplituda CMAP (szczyt-pik) została zmniejszona zarówno dla męskich, jak i żeńskich zmutowanych myszy R528H. (C) Amplituda CMAP spadła o 60% u myszy R528H + / m i o 80% u myszy R528Hm / m podczas ciągłego 2-godzinnego wlewu, podczas gdy CMAP pozostawał stabilny u myszy WT. Nie zaobserwowano różnic w odpowiedziach CMAP pomiędzy samcami i samicami zmutowanymi myszami R528H. (D) Siła skurczowa zmierzona na ścięgnie Achillesa miała proporcjonalny spadek amplitudy szczytowej; dane pochodzą od samców i samic myszy. Wezwanie insuliny glukoza i insulina przez ciągły wlew dożylny (0,5 ml / h) spowodowało wyraźne zmniejszenie amplitudy CMAP i szczytowej siły skurczowej w ciągu minut zarówno dla heterozygotycznych, jak i homozygotycznych myszy R528H, ale nie dla zwierząt kontrolnych (Figura 4, A i C). Ta utrata pobudliwości mięśni utrzymywała się przez 2-godzinny wlew. Efekt dawkowania genów zaobserwowano przy szybszym i większym spadku amplitudy dla myszy R528Hm / m niż dla heterozygot R528H + / m (P = 0,02) [patrz też: olx bedzin, olx maków maz, orzechy włoskie kalorie ]