lecznica weterynaryjna mokotów

Łącznie dane pokazują, że leczenie inhibitorami PTP1B złagodziło skutki zaburzania funkcji MECP2 w męskich i żeńskich modelach myszy RTT. Hamowanie PTP1B prowadziło do zwiększonej fosforylacji TRKB, receptora dla BDNF. PTP1B został zwalidowany jako główny regulator insuliny i sygnalizacji leptyny (19); jednakże, ponieważ środki przeciwcukrzycowe były niewystarczające, aby przedłużyć żywotność samców myszy mutujących Mec / y / y, zbadaliśmy, czy korzystne efekty hamowania PTP1B były związane ze zmianą innych szlaków. Skupiliśmy naszą uwagę na BDNF ze względu na jego rolę w utrzymaniu kilku procesów w mózgu i raportami starań o poprawę sygnalizacji BDNF jako podejścia do rozwiązania problemu RTT (40. 42). Najpierw określiliśmy poziomy BDNF w mózgu myszy WT i mutantów Mecp2. Chociaż poziomy BDNF były zmniejszone zarówno u myszy Mecp2y / y jak i Mecp2a / + w porównaniu z tymi u kontrolnych, BDNF był nadal obecny na poziomie 60% do 70% poziomów wykrywanych u myszy kontrolnych WT (Figura 6, A i B) . Było to zgodne z innymi doniesieniami (11, 43) i sugeruje, że upośledzenie sygnalizacji BDNF poprzez jego pokrewny receptor, zamiast utraty samego BDNF, może być głównym czynnikiem przyczyniającym się w tych modelach RTT. W związku z tym zbadaliśmy stan fosforylacji tyrozyny i aktywację kinazy B związanej z tropomiozyną BDNF (TRKB). Zaobserwowaliśmy, że fosforylacja tyrozyny TRKB była osłabiona u myszy Mecp2a / + traktowanych solą fizjologiczną w porównaniu z obserwowanymi w kontrolach WT. Przeciwnie, traktowanie inhibitorem PTP1B CPT157633 prowadziło do zwiększonej fosforylacji tyrozyny TRKB u samic myszy WT i Mecp2 (3 / + heterozygotycznych (Figura 6C). Figura 6 Hamowanie PTP1B prowadziło do zwiększonej fosforylacji TRKB i zwiększonej sygnalizacji w odpowiedzi na BDNF. (A) poziomy BDNF mierzone za pomocą testu ELISA u przodomózgowia myszy P30 Mecp2y / y (szary słupek) w porównaniu ze zwierzętami WT (czarny pasek) (n = 10, test ucznia, P = 0,015). (B) Poziomy BDNF mierzono za pomocą ELISA w przodomózgowach 10-tygodniowych myszy Mecp2a / + (szary słupek) w porównaniu ze zwierzętami WT (czarny pasek) (n = 10, test ucznia, P = 0,023). (C) Białka fosforylowane przez tyrozynę poddano immunoprecypitacji z myszy WT traktowanych roztworem soli i CPT157633 lub myszy Mecp2a / +, a immunoprecypitaty zostały poddane blottingowi dla TRKB (górny panel). Poziomy TRKB w każdej próbce mierzono przez immunoblotting lizatu przeciwciałem anty-TRKB (dolny panel). (D) Lizaty mózgu otrzymane od samic myszy WT traktowanych CPT157633 inkubowano z WT PTP1B lub mutantem pułapką PTP1B-D181A, w obecności lub bez obecności nadtlenadynianu. Immunoprecypitaty PTP1B poddano SDS-PAGE i poddano immunoblottingowi z przeciwciałem rozpoznającym TRKB (górny panel) i PTP1B (dolny panel). (E) WT i zmutowane formy FLAG-TRKB eksprymowano w komórkach SH-SY5Y. Niestymulowane i stymulowane BDNF komórki poddano lizie i poddano immunoprecypitacji stosując przeciwciało anty-FLAG. Immunoprecypitowane próbki rozdzielono na żelach SDS i poddano immunoblottingowi przy użyciu przeciwciała 4G10 przeciw fosfotyrozynie. (F) Lizaty stymulowane BDNF z komórek SH-SY5Y eksprymujących WT i zmutowane postacie TRKB inkubowano ze zmutowaną postacią PTP1B z substratem i immunokompleksy rozdzielono na żelach SDS i poddano immunoblottingowi przy użyciu przeciwciała anty-FLAG w celu monitorowania ekspresji TRKB. (G) Reprezentatywny blot pokazujący, że traktowanie CPT157633 skutkowało zwiększoną fosforylacją Y705 / Y706-TRKB na mózgu Mecp2a / +. (H) Reprezentatywny blot pokazujący wpływ traktowania CPT157633 na fosforylację tyrozyny receptora TRKA w mózgu Mecp2a / +. (I) Reprezentatywny blot pokazujący wpływ traktowania CPT157633 na fosforylację tyrozyny receptora TRKC w mózgu Mecp2a / +
[hasła pokrewne: olx bedzin, olejek z wiesiołka, obliteracja ]