usg 4d elbląg

Słaba ekspresja CaV1.1 w systemach heterologicznych uniemożliwiła testowanie, czy zmutowane kanały CaV1.1 HypoPP wspierają anormalne prądy bramkowe. Zarejestrowaliśmy prądy jonowe w stanie ustalonym w napięciowych włóknach (flexor digitorum brevis i lumbricales) od myszy R528Hm / m, aby znaleźć dowody na obecność prądu bramkowania. Podobnie jak w naszych wcześniejszych badaniach z włóknami HypoPP NaV1.4 (22), zastosowano mieszaninę blokerów (tetrodotoksyna, Ba2 +, Co2 +, 4-aminopirydyna, kwas 9-antracenokarboksylowy) i kąpiel pozbawioną Cl, aby stłumić Na +, K +, Ca2 + i Cl. prądy prowadzone przez centralną porę tych kanałów. Czułość wykrywania prądów porowych była dodatkowo zwiększana przez odjęcie pozostałych nieswoistych prądów po dodaniu 3,5 mM La3 +, o którym wiadomo, że blokuje prądy bramkowania w zmutowanych kanałach NaV1.4 (17, 21). W porównaniu z włóknami WT, prądy wrażliwe La3 + zarejestrowane z włókien R528Hm / m miały większy składnik wewnętrzny (tj. Amplitudę ujemną) przy wszystkich potencjałach testowych poniżej <55 mV (P <0,05, Figura 6A). Odjęcie odpowiedzi prąd-napięcie zmierzone we włóknach WT od odpowiedzi zmierzonej we włóknach R528Hm / m ujawniło anomalny wewnętrzny prąd w mięśniu HypoPP (Figura 6B), który miał niewielką rektyfikację (prąd skierowany w stronę potencjałów ujemnych był większy niż prąd na zewnątrz przy bardziej dodatnim potencjały, Figura 6B). Te cechy biofizyczne są zgodne z prądem bramkowym zależnym od napięcia, w którym anomalny szlak dla przewodnictwa jonowego był permisywny dla ujemnych potencjałów (Figura 6C), ale był zamknięty przez ruch czujnika napięcia S4 w zdepolaryzowanych potencjałach. Przewodność szczytowa wewnętrznego przepływu w bramce wynosiła 28 nS / nF we włóknach R528Hm / m, co było porównywalne z wielkością prądów bramkowania wykrywanych w mięśniu HypoPP NaV1.4, 7 nS / nF w heterozygotycznych R528H + / m włóknach (22 ) i które w modelach obliczeniowych są wystarczające do spowodowania podatności na depolaryzację Vrestu w niskim K + (23). Figura 6 Określenie prądu bramkowania w R528Hm / m włókien. (A) Zależność napięcia prądu La3 + zarejestrowanego w stanie ustalonym wykazuje zwiększony prąd skierowany w stronę ujemnych potencjałów dla włókien R528Hm / m (n = 6) w porównaniu z włóknami WT (n = 15). (B) Odjęcie średnich odpowiedzi w A ujawniło prąd prostujący do wewnątrz w włóknach R528H. Linia przerywana wskazuje liniową przewodność 28 nS / nF. (C) Schemat ideowy ilustrujący zależność napięcia prądu bramkowania wytwarzanego przez mutację argininy w zewnętrznej powierzchni czujnika napięcia S4. Utrata wady funkcji dla prądów CaV1.1 R528H. Prądy jonowe prowadzone przez centralną porę kanałów CaV1.1 mierzono za pomocą 2-elektrodowego zacisku napięciowego z krótkich włókien mięśniowych oderwanych od stopy (flexor digitorum brevis i lumbricales). Nośnik ładunku był 2 mM Ba2 + w celu ułatwienia blokowania wewnętrznych kanałów prostowniczych K i minimalizowania aktywowanych przewodników Ca2 +. Prądy rejestrowano w roztworze tetraetyloamoniowym (140 mM), wolnym od sodu, wolnym od chlorków, w celu stłumienia prądów chlorkowych i sodowych. Wewnętrzne prądy Ba2 + aktywowano przy potencjałach wynoszących. 40 mV lub więcej i osiągały szczyt przy ~ 15 mV (Figura 7A). W porównaniu z odpowiedziami we włóknach WT gęstość prądu była zmniejszona o 53% w R528Hm / m włókien (n = 23, P <0,001) i uśredniona o 10% niższa w heterozygotycznych włóknach R528H + / m, chociaż różnica ta nie była znacząca. Relacja prąd-napięcie pasowała do przewodnictwa Ohmowego (Gmax) skalowanego przez zależne od napięcia określenie bramkowania (Figura 7A); I = Gmax (V. Erev) / [1 + exp (V. V1 / 2) / K], gdzie Erev jest potencjałem odwracającym, V1 / 2 jest punktem środkowym dla aktywacji zależnej od napięcia, a K jest współczynnikiem stromości [przypisy: objawy grzybicy pochwy, oct oka, olx beagle ]